Empresas interesadas en licenciar la tecnología para su explotación comercial.
Biomedicina
Descripción
Los miRNAs son moléculas de RNA de pequeño tamaño implicadas en regular la expresión de numerosos genes. La desregulación de estos miRNAs está asociada a la mayoría de procesos patológicos crónicos humanos (cáncer, diabetes y enfermedades neurodegenerativas), por lo que su análisis supone un campo de relevancia creciente. Sin embargo, su reducido tamaño y su escasa concentración obstaculizan el estudio y la cuantificación precisa de las especies de miRNA presentes en una muestra biológica.
En la actualidad, aunque la secuenciación masiva paralela, miRNA-seq, se postula como la técnica más prometedora para el análisis de estas especies, los problemas de reproducibilidad asociados a la etapa de preparación de librerías dificultan su aplicación.
La presente invención propone un método de fabricación de librerías de miRNAs para secuenciación masiva en ausencia de la reacción de ligación. Habitualmente, la adición de adaptadores mediante esta reacción conlleva a la aparición de sesgos que alteran considerablemente las frecuencias relativas de las especies de miRNA. Nuestra tecnología permite eliminar estos sesgos de ligación, consiguiendo un aumento de la eficiencia y una disminución de los costes.
La preparación la librerías se lleva a cabo mediante nanotecnología que permite añadir los adaptadores de secuenciación masiva necesarios mediante Taq polimerasa, sin precisar de la reacción de ligación. Por tanto, se utilizan partículas magnéticas que presentan en su superficie oligonucleótidos unidos covalentemente en 5', sobre las que se retrotranscribe el miRNA y se añaden los adaptadores de secuenciación mediante Taq polimerasa.
Ventajas y beneficios
-
Reducción de sesgos. El sesgo de ligación es un problema metodológico aún no resuelto, cuyo error es muy difícil de cuantificar. El uso de nanotecnología permite eliminar las reacciones de ligación del proceso y como consecuencia suprimir los sesgos asociados a ésta.
-
Incremento de la eficiencia. Con nuestro proceso de fabricación de librerías se consigue un aumento de la eficiencia del proceso, la cual se encuentra afectada en los procedimientos habituales por los problemas asociados al desarrollo de la reacción de ligación.
-
Reproducibilidad de resultados. La fabricación de librerías en ausencia de reacción de ligación permite solventar los problemas de reproducibilidad debidos a los sesgos originados esta reacción.
-
Reducción de costes. La menor aparición de problemas durante el proceso de fabricación y la consiguiente mejora de eficiencia, favorecen a una disminución de los costes asociados.